什么是蛋白磷酸化呢？ 1. 蛋白质磷酸化标志着蛋白质的信号激活，这是蛋白磷酸化的最基本的概念。蛋白质的磷酸化决定蛋白质的构建和活性，影响着细胞内的讯息传递过程，以对外在刺激作出适当反应。 2. 蛋白激酶负责体内蛋白质的磷酸化，它和负责蛋白质的脱磷酸化的蛋白质脱磷酸化酵素有着相对的功能。 3. 人类基因组内共含有大约500个蛋白激酶基因，占人类基因组的大约2%。 那么信号分子（蛋白）磷酸化的意义又是什么呢？ 如果一个普通蛋白没有磷酸化情况下，那么它的信号通路是关闭的状态，当上游的ATP和蛋白激酶的帮助下，使得这个蛋白进行了磷酸化修饰，使得蛋白变构，处于一个激活状态，然后信号通路传递至下游，然后再通过磷酸酵素的作用脱掉这个磷酸基团，又处于一个非激活状态，然后由此循环。一般就是磷酸化越强，那么其信号激活就越强。 Western blot： 蛋白免疫印迹是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中经常使用的一种实验方法。利用特定抗体能够专一结合其抗原蛋白质的原理来对样品进行着色，通过分析着色的位置和着色的深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中的表达情况的信息，来分析检测特定蛋白质的生物学检测技术。 那么蛋白印在膜上后，用一抗二抗来识别，那么识别的分子越多呢，其条带就会越浓，需要注意的是，使用一抗的抗体的时候，最好选用识别磷酸化的抗体，而不是识别普通的抗体，因为磷酸化的蛋白才是被激活的蛋白。 至于抗体的选择呢，一般是通过文献来确定，或者一些比较大的抗体公司网站去比对。例如，Biocompare里，在抗体筛选里面，还能查看所选抗体的评价，或许能对自己的实验提供一些意见和帮助。 在选择抗体的时候呢，可以选择多抗抗体，也可以选择单抗抗体，因为多抗和单抗抗体在Western的使用上没有很明显的差别，反而有时候多抗的选择会出现比选择单抗还要好一些的情况，可能的缺点是会出现较多的杂带的风险，这个就需要和自己所需要的实验进行一个平衡。