耐热型T7 RNA聚合酶

中文名称：耐热型T7 RNA聚合酶
英文名称：Thermostable T7 RNA Polymerase
产品规格：5000U|25000U
我公司提供两种T7 RNA聚合酶：野生型T7 RNA聚合酶（MT0129）和耐热型T7 RNA聚合酶。与野生型噬菌体T7 RNA聚合酶相比，耐热T7 RNA聚合酶可在更高的温度下进行体外转录。它可在37-52℃条件下进行高效的体外转录，最佳温度为37℃，50℃反应条件下仍然保留50%以上的活性，而野生型在此温度下无活性。基于耐热的体外转录反应特性具有以下优势：
① 提升了GC含量较高RNA的转录效率；
② 提升了长片段RNA的合成能力；
③ 在使用帽类似物时，提高了共转录的加帽效率；
④ 减少了dsRNA副产物的形成，降低了合成RNA的免疫原性;
⑤ 提升NASBA和CRISPR核酸扩增检测性能。该系列酶均来自重组E.coli BL21菌株纯化而得，无核酸酶污染。

应用实例：
1．野生型和耐热型T7 RNA聚合酶的耐热性能比较。以20ng DNA作为模板，分别在反应体系（20μl）中加入100U的T7 RNA聚合酶和耐热型T7 RNA聚合酶进行体外转录，结果可见耐热型T7 RNA聚合酶在50℃仍具有较高活性，而野生型T7 RNA聚合酶在该温度下没有活性。


2．热稳定无机焦磷酸酶对转录产量的影响。在反应体系（20μl）中加入0.02U的热稳定无机焦磷酸酶（货号：MT0099）可显著提高转录产物的产量。


3．以不同大小的线性化质粒作为模板，应用耐热型T7 RNA聚合酶进行转录性能测试。由结果可见：耐热型T7 RNA聚合酶在50℃条件下仍具有理想的转录活性。


4．以不同大小的PCR产物作为模板，应用耐热型T7 RNA聚合酶进行转录性能测试。由结果可见：耐热型T7 RNA聚合酶可有效转录>5000nt的RNA分子。


产品组成：

储存：-20℃可保存2年，避免反复冻融。

1×T7 Transcription Buffer：
40mM Tris (pH7.8),20mM NaCl,18mM MgCl2,2mM Spermidine HCl,10mM DTT。

贮存液：
10mM Tris-HCl,0.1M NaCl,1mM DTT,0.1mM EDTA,50% Glycerol,0.01% (w/v) Triton X-100。

活性定义：
在标准反应体系下，50℃ 1小时内将1nmol的ATP掺入酸不溶物所需要的酶量定义为一个活性单位。

热失活：75℃，10min。

其它体外转录辅助试剂：

使用方法：

1．配制反应体系

2．50℃孵育1-3h。

3．使用RNase-Free Dnase I去除DNA模板（可选）在体外转录反应结束后，向上述20μl反应液中加入5μl的10×RD Buffer和2μl RNase-Free DNase I(10U/μl)，并加入23μl的RNase-Free H2O至50μl，37℃孵育15min。

4．转录产物的纯化，体外转录产物可选用RNA快速纯化试剂盒进行柱式纯化，以去除多余的盐、蛋白等杂质。也可以采用经典的LiCl沉淀法。

注意事项：
1．转录DNA模板的种类：推荐使用含T7启动子的线性化质粒和PCR产物作为模板。
2．转录模板的纯度会显著影响体外转录反应。在质粒DNA抽提过程中残留的RNase A会显著影响转录RNA的质量。通过酚-氯仿抽提的质粒DNA为最佳模板。
3．该酶对高浓度NaCl或KCl不耐受，当其浓度高于150mM时，其活性受到显著抑制（~50%）。
4．在20μl反应体系中加入0.02U热稳定无机焦磷酸酶可显著提高转录产量（提高25～50%）。 

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！