石蜡包埋组织DNA快速提取试剂盒（特殊无毒脱蜡方式)

中文名称：石蜡包埋组织DNA快速提取试剂盒（特殊无毒脱蜡方式)
英文名称：DNA rapid extraction kit from Paraffin-embedded tissue
产品规格：50次
本试剂盒采用特殊的脱蜡方式和裂解条件释放组织切片中的DNA，从最大程度上减少了因福尔马林交联对DNA的损伤。此外，采用可以特异性结合DNA的离心吸附柱和独特的缓冲液系统进行FFPE DNA提取。整个过程不涉及有机试剂二甲苯，安全可行、简单快速；提取的基因组完整性好，纯度高，质量稳定可靠。使用本试剂盒提取的FFPE DNA可适用于多种下游应用，如PCR和real-time PCR；SNP基因分析和STR基因分析；药物基因组学研究等。

产品特点：
·方便快捷：整个操作过程在1小时内完成。
·安全可行：不涉及二甲苯等有机试剂，无毒无害。
·经济高效：无需蛋白酶K消化，独特的裂解液和特异的吸附柱提取高纯度的DNA。

试剂盒组成：

保存条件：室温（15-25℃）干燥条件下，可保存12个月，更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存条件下，若溶液产生沉淀，使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间，必要时可在37℃水浴中预热10min，以溶解沉淀。

注意事项：（请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项)
1．拿到样品后要尽快在4-10%的福尔马林中固定，固定时间以8-24小时为宜，时间过长导致基因组断裂，影响下游实验。
2．确保包埋前的样品彻底脱水，残留的福尔马林会抑制PCR检测酶的作用。
3．本产品适用于医学、科学实验研究。
4．本产品所提DNA的完整性依赖于样本类型、储存时间以及固定条件。如果甲醛固定时间过长或样本存放时间过久（＞1年）则易导致DNA完整性受损，无法扩出长片段。
5．若裂解液GL、缓冲液GD中有沉淀，可在37℃水浴中重新溶解，摇匀后使用。
6．试剂盒中各试剂在使用前应按照说明书要求操作。
7．DNA含量极低的石蜡包埋组织样本推荐使用T我司WH0015石蜡包埋组织DNA提取试剂盒进行提取。

使用方法：
第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明在GD和PW中加入无水乙醇!所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。

1．样本处理
  a.石蜡切片：取石蜡切片（5-10μm厚，1×1cm2大小）5-8张。
  b.石蜡块：手术刀刮取约30mg的组织样本（尽量去除多余的石蜡）。
  注意：如果样品表面暴露于空气中，最初刮取的2~3片弃掉不用。
  c.福尔马林等固定液中的样本：取30mg样本，用手术刀切为数块,置于1.5 ml离心管中,加入500μl PBS （10mM，pH7.4)涡旋振荡混匀12000rpm（~13400×g )室温离心1 min,弃上清，重复3次。
2．将样本装于1.5 ml无菌离心管中，加入500μl裂解液GL，再加入50 μl缓冲液GP，剧烈涡旋10 sec。
3．98℃孵育30 min，期间颠倒混匀3次，直至样品完全溶解。
  注意：水浴请用长镊子操作。
4．12000rpm（~13400×g )室温离心5 min。
5．使用200 μl枪头沿管壁小心吸取中间层的水相清液于新的离心管中（上层是石蜡及蛋白混合物，下层为少许杂质沉淀，如果分层不彻底可以延长离心时间，直到上层混合物和水相清液很好的分开）。
6．（可选步骤）如果要去除RNA，可以将样品中加入2 μl RNase A（100 mg/ml），室温孵育2 min后，进行下一步操作。
7．加入2倍体积的无水乙醇（例：450 μl水相清液加入900 μl无水乙醇），充分混匀，静置3min。
8．将上一步所得的混合液加入一个吸附柱CR2中，8000rpm（~6,000×g )室温离心2 min，倒掉收集管中的废液，重新将吸附柱放回收集管中。
  注意：吸附柱最大容量为700 μl，可将剩余液体重复上述步骤上柱。
9．向吸附柱CR2中加入500μl缓冲液GD，8000rpm（~6,000×g )室温离心1 min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。
10．向吸附柱CR2中加入600 μl漂洗液PW 8000rpm（~6,000×g )室温离心1 min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。
11．重复操作步骤10。
12．将吸附柱CR2放回收集管中，12000rpm（~13400×g )，离心2 min，倒掉废液。将吸附柱开盖置于室温放置2-5 min，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
  注意：乙醇残留会抑制后续的酶反应，所以晾干时要确保乙醇挥发干净。但也不要干燥太长时间，以免难以洗脱DNA。
13．将吸附柱CR2转入一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加65℃预热的30-100 μl洗脱缓冲液TE或ddH2O洗脱，室温放置2-5min，12000rpm （~13400×g)离心2 min，将收集有DNA的离心管-20℃保存。
  注意：洗脱缓冲液体积不应少于30 μl，体积过小影响回收效率。为增加基因组DNA的得率，可将离心得到的溶液再加入吸附柱CR2中，室温放置2 min，12000rpm（~13400×g )离心2 min。洗脱液的pH对于洗脱效率有很大影响。若用ddH2O做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率；且DNA产物应保存在-20℃，以防DNA降解。 

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！