蛋白浓缩柱(0.5ml)

中文名称：蛋白浓缩柱(0.5ml)
英文名称：
产品规格：1个
蛋白浓缩柱是一种方便的蛋白浓缩脱盐工具，只需要离心操作即可以用来对蛋白质液体样本进行浓缩，还可以用于蛋白质、抗原、抗体、酶和微生物的浓缩纯化。也可以用来对蛋白质样品中的盐分、糖类、核酸、非水溶剂及其他一些低分子量物质进行去除和缓冲液置换。还可以用来分离蛋白质标记时未结合上的游离标记物。
蛋白浓缩柱使用蛋白质低吸附性的再生纤维素过滤膜制造，具有快速、方便、回收率高的特点，可替代并优于透析及蛋白沉淀法蛋白浓缩。
蛋白浓缩柱有多种规格可供选择。

储存条件：室温避光保存。
用过的浓缩管要保持过滤膜湿润，不能干掉。
注：浓缩柱配有2个微量离心管。
在操作过程中，一个可用于收集滤出液，而另一个用于回收浓缩后的样本。
有效期：一年。
应用场景：
1．对稀释或从柱洗脱液预先纯化的蛋白质进行浓缩；
2．组织培养提取物或细胞裂解液中大分子组分的纯化；
3．生物样品浓缩：包括各种抗原、抗体、酶、核酸或微生物；
4．脱盐和缓冲液更换。

产品特点：
1．高回收率 >90%；
2．垂直结构的膜减少了浓差极化，加快离心速度，快达 5分钟；
3．热密封膜将下游溶出物污染可能性降到最低；
4．100% 完整性检测确保性能可靠；
5．透明外壳和体积刻度方便样品察看；
6．直接吸取样品减少处理步骤；
7．高浓缩倍数：高达80–100倍
自备试剂耗材和仪器：
● 纯水 ● 吸头、离心管 ● 移液器 ●冰盒 ●离心机；可容纳1.5ml微量离心管的固定角度转子离心机。●冰箱

使用方法：
清洗浓缩柱：
1．用缓冲液或纯水进行预清洗。也可先用0.1 M NaOH 清洗，再用缓冲液或纯水进行二次清洗。
2．离心管中的过滤膜一旦润湿后应避免变干。如果在预清洗后不是立即使用，则让液体保留在滤膜上，直到使用。
浓缩使用方法：

使用注意事项：
● 不同的蛋白浓缩的速度不同，有的需要长时间离心，有的则很快就好。和蛋白样品纯度，所用buffer 类型，蛋白的浓度有关系。离心时要先短些时间，观察一下浓缩速度；
● 如果需要多次重复使用，离心速度不要太高；
●重复使用时要仔细检查管壁上有没有裂纹；
● 浓缩柱浓缩蛋白会有蛋白损失，样品体积大就分批离心，尽可能不要离心时间太长
● 样品里的杂质如果可能尽量在离心前去除一些。
●分子量小于5kD的溶质可能只有部分被截留。2kD的样品截留率大约只有40%。过滤膜的截留率取决于溶质的分子大小和形状。目的蛋白小于5kD的样品不要使用浓缩柱浓缩。
● 浓缩液的样本回收率低可能是由于吸附损失、过度浓缩，或样本穿过滤膜而造成的。
● 吸附损失取决于溶质浓度、疏水性、与过滤浓缩管表面接触的温度和时间、样本成分及pH。为了最大限度降低损失，离心后请立即回收浓缩后的样本。
● 如果样本的起始浓度很高，请监控离心过程，以免样本过度浓缩。过度浓缩会导致沉淀，这也可能带来样本损失。
● 样本有可能穿过滤膜，务必将每次的滤过液一直保留到浓缩的样品分析测试完成。
● 样品蛋白最低起始浓度为25μg/ml。
● 加蛋白液或Buffer到浓缩管时，可以用蓝枪头；但从浓缩管底吸取浓缩好的目的蛋白时，必须用黄枪头；用枪头伸入浓缩管中时，必须防止碰到滤膜，以免戳破滤膜。
操作步骤：
1．将内管插入所提供的一个微量离心管中。
2．向内管中加入不超过500μl的样本，并盖上盖子。
3．将盖好盖子的浓缩管放入离心转子中，让盖子的连接带朝着转子的中央；用一个类似的离心管平衡。
4．以2000-10000 xg离心约10-30分钟。
【注】：
● 务必将滤过液一直保留到浓缩的样品分析测试完成。
● 影响流速的因素包括样本浓度、起始体积、溶质的化学性质、相对离心力、离心转子的角度、滤膜类型以及温度。500μl样本的典型离心时间大约是10至30分钟。尽管大部分样本在离心开始后的前5至10分钟发生过滤，但在离心10至30分钟后才能达到最低的浓缩液体积(15-20μl)。
5．离心结束后将整个浓缩管从离心机中取出，取出内管。
6．为了回收浓缩后的溶质，将内管倒过来插在另一个干净的微量离心管中。放在离心机中，让打开的盖子朝着转子的中央；用一个类似的离心管进行平衡。以1,000 xg离心2分钟，使浓缩后的样本从浓缩内管转移到收集管中。滤液可以保存在收集管中。
【注】：
● 要达到理想的回收效果，请尽早进行倒置离心。
● 也可不倒置离心，直接用移液器直接吸出内管中的样品。
脱盐使用方法：

使用注意事项：
● 盐分通过滤膜的过程不依赖样品的浓度和体积，用过滤的方法来脱盐并不改变缓冲液的组成，比如说，含有500mM 盐分的溶液在第一次离心后它的剩余液体盐浓度并不发生改变，依然是500mM。再往浓缩管中剩余溶液中加入水或无盐缓冲液，再次离心，则会降低溶液中的盐浓度。
● 这个过程我们将它称为等体积过滤，反复多次地操作，可以使溶液盐分降到最低。
● 如果我们想将样品用不同组份缓冲液溶解，则我们可以使用等体积过滤达到目的。样品浓缩后，然后加入目的缓冲液，再进行反复的稀释和浓缩。。
操作步骤：
1．把样品置于过滤装置的储液管中；
2．如果样品体积小于过滤装置的最大体积，则可以把它稀释到最大体积后再离心，这有助于更有效地除去盐分；
3．在特定的离心力下和推荐的时间进行离心；
4．将滤过液从滤管中取出，放置一旁；
5．加入水或缓冲液使样品体积达到0.5ml；
6．再次离心；
7．取出滤过液，放置一旁；
8．回收浓缩的已脱盐样品。
【注】：
● 请将两次的滤过液一直保留到浓缩的样品分析测试完成。
清洗和保存：
1．使用后用水冲洗干净；
2．内管加入超纯水500μl，5000g离心5分钟；
3．净内管中的水，加入500μl 0.1M NaOH，5000g离心20分钟；
4．用0.1M NaOH 浸泡24小时；
5．用水冲洗干净；
6．用无菌水浸泡2-8℃保存。
7．外管用自来水洗净后，用超纯水冲洗干净，晾干。
【注】：
● 1个月不用的话，直接用100mM的NaOH保存！更长时间的话加0.02%的叠氮钠。
● 再次使用前，用纯水充分冲洗干净，然后在用样品缓冲液平衡。
常见问题分析：
●蛋白浓缩柱会损失蛋白吗？
分子量小于3000 Da的蛋白质或多肽样品会穿透过滤膜，不适合用本浓缩柱进行浓缩。3000 -6000Da的蛋白质会有少量损失。6000Da以上的蛋白质损失很小。
●膜会因为离心时间过长而变干么？
不会，因为浓缩柱有死体积，总会有溶液残留在滤管中。死体积大约10-20μl。
●可以重复使用浓缩柱么？
可以重复使用。如果使用、清洗、保存得当，可以反复使用多次。但是多次重复使用后过滤膜有破损风险，注意使用过程中尽量避免尖锐物品戳到膜。离心力不要过大。
●蛋白在浓缩时出现了沉淀，如何改进？
蛋白如果浓缩过快或者过度浓缩都有可能引起蛋白沉淀。建议蛋白浓缩后的最终浓度不超过20mg/ml。对于对浓缩速度敏感而容易沉淀的蛋白，建议的改进方法是：
1)离心力降低30%-50%
2)在浓缩过程中取出浓缩管，用枪头反复吹吸几次
● 浓缩后发现浓缩液中没有目的蛋白，可能的原因有哪些？
浓缩管的蛋白最低起始浓度为25μg/ml。请确保的样本的起始浓度大于这个浓度。
如果问题仍然出现，请不要丢弃样本滤过液以便用于分析可能的原因：
1)如果目的样本在滤过液中，那么请排查：
a)使用的离心力是否是在限定范围内？如果使用的是rpm，请换算成相应的g离心力，具体换算方法请垂询。
b)离心机最近是否有校准过？
c)是否首次尝试这个蛋白？如果能确保用同样的浓缩管对其它蛋白成功操作的话，那么有可能是这个目的蛋白的原因。有时蛋白会因其本身的一些特性(构象差异)而影响浓缩效果。
2)如果目的样本也不在滤过液中，那么：
a)蛋白样本起始浓度是否大于25μg/mL？
b)用来确定样本浓度的方法是什么？是否可信？
c)目的蛋白是不是沉淀了？
●有时候用蛋白浓缩离心管连水都离不下来，可能是什么原因？
如果出现这种情况，可能时过滤膜的孔被堵住。请先用0.1M NaOH 清洗再离心。
最后用缓冲液或纯水再次清洗后甩干。清洗后的滤膜应立即使用，如暂时不用，请保持润湿状态，避免重新干燥。
● 说明书中推荐在室温下进行离心，考虑到蛋白的稳定性，是否可以在4℃进行离心？
可以，但是低温会增加蛋白样品的粘性，导致流速减慢，建议可将离心时间延长。
●可以用于核苷酸纯化与浓缩么？
可以
● 浓缩柱可以用酒精消毒灭菌么？
浓缩柱与70%乙醇是兼容的。
● 是否可以用于高压灭菌？
不可以，浓缩柱都是采用热封设计，不可以用高压高温灭菌。
● 是否无热源？
均非无热源的
● 如何对蛋白浓缩管进行去除内毒素的处理？
提供的浓缩管是没有经过去内毒素处理的，同时由于内毒素通常以多聚体的形式存在，大小在10-1000KD 之间不等，在浓缩的过程中是无法去除的。可在实验前通过先用0.5M NaOH 预清洗，随后用纯水/缓冲液buffer 清洗的步骤去除大部分内毒素。
● 是否不含 RNA酶？
我们不保证浓缩柱不包含 RNA酶，如果需要处理无Rnase 样品，建议您可以用0.1% DEPC在 37℃浸泡 2小时，以完全灭活 RNA酶。残留的DEPC可以用无酶超纯水洗涤除去。
● 没有液流流出，为什么？
可能是溶液比较粘稠或浓度太高；
●蛋白柱去除去垢剂吗？
去垢剂因其独特的性质，当浓度大于临界微团浓度(Critical Micelle Concentration,CMC)时，去垢剂分子会聚集形成微团而改变分子构象，这有可能会影响去污剂的去除效果。小于CMC 值时可以去除。
● 如何判断浓缩管已经失效？
在正常使用下，滤膜没有被戳破时，浓缩蛋白液中不含有蛋白或量很低(包括目的蛋白)，而第一次的滤下液中含有目的蛋白，则说明滤膜失效，需要换新的浓缩管。 

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！