氨基酸含量测定试剂盒 微量法
产品名称: 氨基酸含量测定试剂盒 微量法
英文名称: Micro Amino Acid (AA) Content Assay Kit
产品编号: BC1575
产品价格: 0
产品产地: 北京市通州区马驹桥联东U谷85A三
品牌商标: Solarbio
更新时间: 2024-12-24T09:36:47
使用范围: null
- 联系人 : 索莱宝-龚思雨
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产品内容:
试剂一:液体100mL×1瓶,4℃保存。
试剂二:液体20mL×1瓶,4℃保存。
试剂三:粉剂×1瓶,4℃避光保存。临用前加入1.33mL无水乙醇,盖紧后充分混匀,再加入18.67 mL蒸馏水混匀,避光保存。
试剂四:粉剂×1支,4℃避光保存。临用前加2 mL蒸馏水,充分溶解。
标准品:粉剂×1支,10mg半胱氨酸,4℃避光保存。临用前加入8.26mL蒸馏水,得到10μmol/mL的半胱氨酸标准溶液备用。
产品说明:
动物肝脏、肾脏是氨基酸代谢的主要器官,故尿中氨基酸的变化最能反应肝、肾的生理状态。另外,氨基酸还能反应灼伤、伤寒等方面情况。植物体内氨基酸含量对研究植物在不同条件下及不同生长发育时期氮代谢变化、植物对氮素的吸收、运输、同化及营养状况等有重要意义。
氨基酸的α-氨基可与水合茚三酮反应,产生蓝紫色化合物,在570 nm有特征吸收峰;通过测定570 nm吸光度,来计算氨基酸含量。
试验中所需的仪器和试剂:
台式离心机、可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、无水乙醇、冰和蒸馏水。
操作步骤:
一、粗酶液提取:
称取约0.1g组织,加试剂一1mL,室温下充分研磨,转移到1.5 mL EP 管中,盖紧后(防止水分散失)置于沸水浴提取15 min;自来水冷却后, 10000rpm,4℃离心10min,取上清液,待测。
二、测定步骤:
1、 分光光度计预热30min以上,调节波长至570nm,蒸馏水调零。
2、 操作表:
试剂名称(μL)
测定管
标准管
空白管
样本
10
—
—
标准品
—
10
—
蒸馏水
—
—
10
试剂二
100
100
100
试剂三
100
100
100
试剂四
10
10
10
混匀后盖紧瓶盖(防止水分散失),置于沸水浴中保温15 min,冷却后反复颠倒EP管数次,将测定管8000rpm离心5min后取上清,于570nm测定吸光值。显色后务必在30min内测完。
氨基酸含量计算:
(1)按样本鲜重计算
氨基酸含量(μmol /g鲜重)=[C标准品×V标准品×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)]×(V样总÷V样)÷W=10×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管) ÷W
(2)按蛋白浓度计算
氨基酸含量(μmol /mg prot)=[C标准品×V标准品×(A测定-A空白)÷(A标准-A空白)]÷(Cpr×V样)=10×(A测定-A空白)÷(A标准-A空白) ÷Cpr
C标准品:标准品浓度,10μmol/mL;V标准品:反应体系中加入标准品体积,0.05 mL;W:样品鲜重,g;V样:反应体系中加入样品体积,0.05 mL;V样总:样品提取液总体积,1mL。