储存条件：Carrier DNA -20℃保存，其它组分可室温保存，有效期1年。

产品说明：

    出品的经典酵母转化试剂盒遵循广大用户的使用习惯，分别提供PEG、LiAC和Carrier DNA溶液，PEG、LiAC均经过滤除菌，Carrier DNA经特殊优化处理，更有助于提高质粒DNA的转化效率。该试剂盒可根据实际需要灵活配制1×LiAc溶液和转化预混液，既方便使用，又经济实惠。

感受态细胞制备：

1.活化菌种。-80℃保存的菌种在固体YPDA培养基平板上划线，30℃培养2-4天。

2.挑取酵母单菌落在固体YPDA培养基平板上划3-5 mm的短线，30 ℃培养2-4天。

3.待酵母单菌落长至2 mm长时，首先把酵母细胞接种到3 mL液体YPDA培养基中，30℃过夜培养。

4.第二天转接到含有30-50 mL液体YPDA培养基的三角瓶中继续培养，待OD600到0.4-0.5范围内。1000 g，离心5 min, 去上清，收集细胞。

5.沉淀用30-50 mL的无菌的去离子水悬浮。1000 g，离心5 min，去上清，收集细胞。

6.沉淀用1.5mL的 1×LiAc重悬后转移至1.5mL 离心管中，1000 g，离心5 min，去上清，收集细胞。

注意：1×LiAc稀释方法：100μl 10×LiAc Solution+900μl无菌水。10×LiAc Solution经过pH缓冲，无需添加TE作为缓冲剂。

7.如进行小体积转化，加入不超过1mL的1×LiAc重悬后按照100μl每管分装备用。

注意：制备好的感受态最好立即使用，再第8步离心未完成前，室温放置不应超过5个小时。

8.1000 g，离心5 min，去上清，收集细胞。感受态细胞即制备完毕。

酵母质粒转化：

1.配制预混液，每转化一个质粒即一个反应需要360 μl的预混液。

2.吸取360 μl的预混液加入感受态细胞中，用枪头反复吹吸沉淀，使酵母细胞彻底悬浮在预混液中。

3.放置在30 ℃的水浴锅中孵育30 min，每10 min混匀一次。

4.放置在42 ℃的水浴锅中热击30 min，每10 min混匀一次。

5.12000 rpm，离心1 min，去掉上清液。

6.（可选步骤：用1 mL YPD Plus Liquid Medium重新悬浮，30℃摇床震荡培养30-60 min。12000 rpm，离心1 min，去掉上清液。）

7.加入100 μl-1mL无菌的去离子水或0.9%氯化钠溶液重悬沉淀。

8.把重悬菌体涂到相应的酵母筛选培养基平板上，30℃培养2-4天。

酵母文库转化：

1. 配制预混液，用于文库转化（需用15-50mL的离心管）。

2. 将上述预混液加入到600 uL 感受态细胞沉淀中，震荡使感受态细胞充分重悬。

3. 放置在30 ℃的水浴锅中孵育50 min，每10 min混匀一次。

4. 放置在42 ℃的水浴锅中热击30 min，每10 min混匀一次。

5. 1000 rpm，离心5min，去掉上清液。

6. （可选步骤：用3 mL YPD Plus Liquid Medium重新悬浮，30℃摇床震荡培养90 min，1000 rpm，离心5min，去掉上清液。）

7. 加入15 mL 无菌的去离子水或0.9% 氯化钠溶液重悬菌体。

8. 把重悬菌体涂到相应的酵母筛选培养基平板上，30℃培养2-4天。

注意事项：

1.初次使用Carrier DNA，请把装有Carrier DNA的管子在沸水中煮沸5 min，然后立即放在冰上，用后-20℃储存备用。下次使用前在冰上解冻Carrier DNA。

2. PEG溶液在低温环境下会析出，请于常温环境下完全溶解后使用。

3. 转化全程需无菌操作。

4. 增加酵母质粒的纯度和浓度可以提高转化效率。