采用竞争ELISA法。用ASD抗原包被于酶标板上，实验时样品或标准品中的ASD与包被的ASD竞争生物素标记的抗ASD单抗上的结合位点，游离的成分被洗去。加入辣根过氧化物酶标记的亲和素，生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下现蓝色，加终止液后变为黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值，ASD浓度与OD450值之间呈反比，通过绘制标准曲线计算出样品中ASD的  Human ASD (Androstenedione) ELISA Kit  中文名称  人雄烯二酮(ASD)酶联免疫吸附测定试剂盒  货号  E-EL-H0508  种属  Human/人  规格  96T/Kit (8*12 strips) 48T/Kit (8*6 strips)  检测方法  竞争ELISA法  检测范围  0.188~12ng/mL  灵敏度  0.113ng/mL   规格  保存  Micro ELISA Plate   8×12 / 8×6*  4℃  Reference Standard   2/1 支*  4℃  Reference Standard & Sample Diluent   1瓶 20mL/12mL*  4℃  Concentrated Biotinylated Detection Ab   1支 120μL/70μL*  4℃  Biotinytated Detection Ab Diluent   1瓶 10mL/6mL*  4℃  Concentrated HRP Conjugate   1支 120μL/70μL*  4℃(避光)  HRP Conjugate Diluent   1瓶 10mL/6mL*  4℃  Concentrated Wash Buffer (25×)    1瓶 30mL/16mL*  4℃  Substrate Reagent   1瓶 10mL/6mL*  4℃(避光)  Stop Solution   1瓶 10mL/6mL*  4℃  Plate Sealer   5/3 张*
  Manual   1 份
  Certificate of Analysis   1 份
  *: [96T/48T]在各孔中加入标准品或样品各50μL
2. 立即在各孔中加入50μL 生物素化抗体工作液
3. 37℃孵育45分钟
4. 洗涤3次
5. 加入100μL酶结合物工作液， 37℃孵育30分钟 
6. 洗涤5次
7. 加入90μL底物溶液， 37℃孵育15分钟左右
8. 加入50μL终止液，立即在450nm波长处测量OD值
9. 结果计算
http://www.elabscience.cn/index.php/product/view/aid/25160.jsp