RIPA裂解液 (RIPA Lysis Buffer)     C1053

描述： RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)对动物细胞胞膜、胞浆、胞核成分均有较强裂解作用，是经典和最常用的细胞组织快速裂解液。使用RIPA 裂解缓冲液制备用于Western特别是用于免疫共沉淀的裂解产物已经是一种首选的标准操作，也适用于大部分抗原表位检测，特别是免疫共沉淀等实验。

组成： 100 ml  RIPA裂解缓冲液。

成分：50 mM Tris-HCl (pH 7.4), 150 mM NaCl, 1% NP-40, 0.1% SDS.

储存：4 ℃保存  12个月有效

制备细胞裂解产物：

1. 800g  4℃离心5分钟收集培养细胞，估计细胞离心后的体积（PCV, 106 cells=~20 ml, 107 cells =~100 ml PCV）；

2. 每50～100 ml PCV加入5倍体积RIPA裂解缓冲液（250~500 ml）,冰浴放置10分钟，并每隔5分钟在漩涡混合仪上振荡30秒；

3. 12000g  4℃离心10分钟，将上清转移到新的离心管中，即得细胞总蛋白产物。

注意：如所得蛋白产物较为粘稠，可先95℃加热5分钟，迅速冰浴5分钟，再进行步骤3

制备组织裂解产物：

1. 取50-100 mg组织在冰上剪成碎片，用预冷的PBS洗涤2次离心弃去PBS；

2. 加入 0.5-1 ml 预冷 RIPA 裂解缓冲液；

3. 4℃用玻璃匀浆器匀浆20-40次，直到95％的细胞被破碎，然后在冰浴中放置10分钟，并每隔5分钟在漩涡混合仪上振荡30秒；

4. 12000g  4℃离心10分钟，将上清转移到新的离心管中，即得组织总蛋白产物。

注意：如所得蛋白产物较为粘稠，可先95℃加热5分钟，迅速冰浴5分钟，再进行步骤4

说明： 

1. 转移上清液时不要吸入底部的沉淀物；

2. 在做免疫沉淀或免疫共沉淀时最好在实验前进行蛋白提取，避免某些不稳定蛋白的降解；

3. RIPA裂解缓冲液中未加入蛋白酶抑制剂，用户可自行选择添加。

使用我司RIPA裂解缓冲液发表SCI论文已达数百篇，部分文章列表如下，供参考：

1、Corporation H P. Secernin-1 Contributes to Colon Cancer Progression through Enhancing Matrix Metalloproteinase-2/9 Exocytosis.[J]. Disease Markers, 2015.

2、Corporation H P. Cytotoxic Effects of Biosynthesized Zinc Oxide Nanoparticles on Murine Cell Lines[J]. Evidence-based Complementary and Alternative Medicine : ECAM, 2015, 2015.

3、Corporation H P. Protective effects of N-acetylcysteine in concanavalin a-induced hepatitis in mice.[J]. Mediators Inflamm, 2015.

4、Corporation H P. Blockade of lysosomal acid ceramidase induces GluN2B-dependent Tau phosphorylation in rat hippocampal slices.[J]. Neural Plasticity, 2014,

5、J. V, T. P, Y. L, et al. Androgen Receptor Activation[J]. Cellular Physiology & Biochemistry, 2014, 33(6):1911-1920.

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12、Kashyap M, Kawamorita N, Tyagi V, et al. Down-regulation of nerve growth factor expression in the bladder by antisense oligonucleotides as new treatment for overactive bladder.[J]. Journal of Urology, 2013, 190(2):757-764.

13、Tisdell, Francis E, et al. "3-(substituted phenyl)-5-(substituted cyclopropyl)-1,2,4-triazole compounds." US, US 6262099 B1. 2001.