Edman降解（Edman degradation）自20世纪50年代问世以来，始终是蛋白质N端测序的经典方法，尤其在蛋白质功能研究、新蛋白鉴定、抗体验证等方向中发挥着关键作用。尽管现代质谱技术已广泛应用于蛋白质组学，但对于精确识别蛋白质N端氨基酸序列，Edman降解仍具备不可替代的价值。然而，这项技术对实验操作的依赖度极高，稍有偏差便可能导致序列信息丢失或解析错误。本文将结合百泰派克生物科技的多年实战经验，分享提升Edman降解精准度的4个关键技巧，助力科研人员获得更清晰、可靠的蛋白质序列数据。

一、样品纯度决定了起跑线

在Edman降解中，样品质量直接影响氨基酸顺序的读取效率和准确性。以下几点尤其关键：

• 蛋白样品需高度纯化：杂蛋白或多组分混合物将显著干扰自动分析仪的读数，造成峰形重叠。
• 避免样品中含盐、表面活性剂、甘油等抑制剂：这些物质会抑制PITC与N端氨基酸的反应，导致顺序识别失败。
• 建议进行SDS-PAGE分离+PVDF膜转印+条带切取：该方式可以有效去除杂质，保留目标蛋白，提高测序专一性。

百泰派克生物科技在蛋白纯化与膜转印方面配有标准化流程和质控机制，确保样品纯度达到Edman降解的最佳标准。

二、确认N端是否可测，是启动的前提

Edman降解的反应依赖于N端α-氨基的存在，然而实际研究中，N端常被翻译后修饰或封闭：

• 乙酰化（N-terminal acetylation）是最常见的N端封闭形式之一，约占真核蛋白的50%以上。
• 信号肽剪切可能导致检测的N端非起始甲硫氨酸，甚至残基序列难以预测。

为避免无效测序，可以通过以下策略预判N端是否可测：

• 使用MALDI-TOF质谱进行N端肽段指纹图谱分析，观察是否存在可测信号；
• 结合蛋白表达系统信息（如哺乳动物vs大肠杆菌）推测N端修饰概率；
• 针对N端封闭的情况，可选择氨基修复试剂进行化学解封处理。

百泰派克提供测序前评估服务，可协助客户判断蛋白是否适合进行Edman测序，避免资源浪费。

三、选择合适的支持介质与载量

Edman降解通常在固相系统中进行，常见支持载体包括玻璃纤维膜、PVDF膜和硅胶基质。而不同载体对样品的亲和力、反应背景、回收效率均有影响。

技巧如下：

• 建议使用高结合力PVDF膜转印蛋白，尤其适用于分子量大于10 kDa的蛋白；
• 控制蛋白点样量在20–100 pmol区间，有助于保证荧光读出线性；
• 小于5 pmol时，建议采用放大点样或聚焦样本的方式提高信号强度。

百泰派克实验平台配备高灵敏度的自动蛋白测序仪，搭配优化后的PVDF膜绑定系统，可实现低至1 pmol的N端氨基酸读取。

四、合理设定循环次数与终点判断

Edman降解采用周期性切除N端氨基酸的方式，理论上可进行50轮以上，但每轮降解效率仅约为94–98%，序列越长，信噪比越差。

建议：

• 一般建议测序深度控制在10–15个残基以内，超过此范围序列可信度显著下降；
• 使用辅助软件实时监控色谱峰变化，判断终点是否已出现（如基线噪音升高、保留时间漂移）；
• 可结合质谱数据进行交叉验证，提高序列准确性。

在百泰派克，每个Edman降解实验都配备专业技术人员手动审查数据，避免仪器自动分析带来的假阳性错误。

尽管质谱技术日新月异，但在面对抗体验证、蛋白表达确认、序列起点界定等具体科研问题时，Edman降解依然不可替代。只要掌握上述技巧，从样品准备到反应参数设定全流程优化，便可大幅提升蛋白质测序的精准度和成功率。百泰派克生物科技专注于蛋白质N端测序服务多年，拥有完备的设备平台与经验团队，致力于为您提供高可信、高分辨率的测序解决方案。

百泰派克生物科技特色项目

一、蛋白测序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos质谱仪及岛津公司埃德曼降解测序系统对蛋白质序列进行分析，提供基于质谱的蛋白测序分析服务，包括对蛋白质的氨基酸组成分析，N端测序，C端测序和全序列分析，以及基于埃德曼降解的蛋白质N端序列分析服务。对于未知理论序列的蛋白质，提供基于从头测序法的蛋白质从头测序服务，对蛋白序列进行分析。

※服务优势：

1.采用目前世界上先进的质谱仪器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可实现对所测定靶蛋白序列 100% 的覆盖;

3.可测定蛋白N端多达 70个氨基酸序列;

4.可测定多种形式的样品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白条带;

5.样品用量低: 蛋白样品仅需 5-10ug，即可完成检测;

6.测序不受N端封闭，PEC和和糖基化等N端修饰的影响。

二、蛋白质组学

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos质谱平台结合Nano-LC，提供定量蛋白质组学、靶向蛋白质组学、多肽组学、翻译后修饰蛋白组学等多种蛋白质组学分析服务。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4D蛋白质组学服务，助力微量样本蛋白组学、大样本群医学及高通量修饰组学等研究工作。

※服务优势：

1 .高通量定量蛋白分析:多对照组大规模实验分析，发现新的生物标记物;

2.体内体外多种蛋白质标记方法，适用于分析组织、细胞、血液等多种样品;

3.质谱分析灵敏度高，实验结果重复度高;

4.可检测较低丰度蛋白，线性范围广;

5.专业生物信息学分析，分析更系统准确。

三、单细胞质谱流式技术分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm质谱流式系统进行单细胞质谱流式技术分析，采用金属元素标记物（通常是金属元素标记的特异抗体）标记细胞表面和内部的分子，然后用流式细胞原理分离单个细胞，再用电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）分析单个细胞的原子质量谱，最后将原子质量谱数据转换为细胞表面和内部的信号分子表达量。

※服务优势：

1.技术先进，填补技术空白

采用金属标记抗体技术，避免了传统流式荧光通道少且易相互影响的问题。可在单细胞层面上对多种指标同时进行表征，百泰派克生物科技可做到同时检测51个目标蛋白。

2.分析数量大，成本较低

单细胞RNAseq受成本等因素限制，所有样本细胞汇总的分析数目一般在2x10^4个左右，而流式质谱技术一次（单样本）就可分析至少10^5的细胞，实现了数量级的提高，且成本不高于单细胞RNAseq。

3.应用前景大

①流式质谱结果可以给出细胞亚群的变化，在临床诊断、疾病机制研究等方面具有极大的研究前景；

②将金属标签技术与其他技术结合会有新应用方向。除常规蛋白外，质谱流式细胞技术还可用于蛋白翻译后修饰；

③可检测细胞存活率、细胞大小、mRNA转录子表达量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现

百泰派克生物科技的基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现一站式解决方案包括我们专有的、高度敏感的免疫肽富集和鉴定方案。我们能够帮助您实现10,000个以上I型多肽和10,000个以上II型多肽的鉴定和识别。通过我们优化的高通量免疫多肽组学分析平台进行免疫肽组学分析，可从最小的样品材料中进行可重复的识别和定量。该服务可以应用于大规模的研究，旨在助力科研工作者寻找癌症、免疫疾病及传染病的解决方案，深入挖掘未知的靶标。

五、生物药物表征

百泰派克基于高分辨率质谱技术，MALDI TOF，高效色谱分离技术，提供一系列完善的生物药物分析方案，从蛋白质、多肽、抗体、疫苗等生物制品的氨基酸组成和一级结构分析，到产品变异性和纯度分析。旨在提供优质生物药物分析服务，帮助生物医药生产商提高生物药物品质。

百泰派克生物科技七大检测平台

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物质谱多组学优质服务商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于为生物/制药和医疗器械行业提供质量控制检测和项目验证等专业服务。公司实验室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法规和指导原则，通过CNAS/ISO9001双重质量体系认证，建立了完备的质量体系，数据冷热/异地备份，设备定期计量/期间核查，软件审计追踪，为客户提供一体化解决方案和技术服务，支持新药研发、药物申报注册和生产放行。

1.公司采用ISO9001质量控制体系，专业提供以质谱为基础的CRO检测分析服务；

2.获国家CNAS实验室认可，为客户提供符合全球药政法规的药物质量研究服务；

3.业务范围覆盖蛋白质组学、多肽组学、代谢组学、生物药物表征、单细胞分析、单细胞质谱流式、生信云分析以及多组学生物质谱整合分析等；

4.七大质量控制检测平台，满足您一站式服务需求；

5.服务3000+企业，10000+客户的选择；

6.致力于为您提供优质的生物质谱分析服务!

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